Details

Autor(en) / Beteiligte

• 帅良
• 殷菲胧
• 廖玲燕
• 刘云芬
• 段振华
• 李丽
• 何雪梅
• 李昌宝
• 孙健

Titel

香蕉果实MaNPC1基因原核表达及多克隆抗体制备

Ist Teil von

• 南方农业学报, 2021, Vol.52 (7), p.1753-1761

Ort / Verlag

广西农业科学院农产品加工研究所/广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室/广西果蔬贮藏与加工新技术重点实验室培育基地,南宁 530007%贺州学院食品与生物工程学院/食品科学与工程技术研究院,广西贺州 542899%广西农业科学院农产品加工研究所/广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室/广西果蔬贮藏与加工新技术重点实验室培育基地,南宁 530007

Erscheinungsjahr

2021

Quelle

EZB Electronic Journals Library

Beschreibungen/Notizen

• S668.103.6; [目的]对香蕉果实非特异性磷脂酶C基因(MaNPC1)开放阅读框(ORF)进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为深入探究MaNPC1在香蕉果实抵御炭疽病中的作用机制提供理论依据.[方法]克隆MaNPC1基因ORF序列,对其进行生物信息学分析及抗原性预测,并通过双酶切法构建其原核表达载体,利用热激法转入大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,重组蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫新西兰兔,以制备多克隆抗体.同时,运用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测香蕉果实贮藏过程中在炭疽病侵染胁迫下MaNPC1蛋白表达水平及MaNPC1基因相对表达量.[结果]重组质粒pGEX-6p-3-MaNPC1经双酶切后得到1650 bp的特异性条带,说明原核表达载体构建成功,将其转入大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞后成功表达.MaNPC1蛋白分子式为C2747H4249N769O793S10,分子量为61.06 kD,理论等电点(pI)为8.96;丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和丝氨酸含量较高,分别占氨基酸总数的8.7％、8.2％、7.8％和7.7％;不稳定指数为47.14,表明其为不稳定蛋白;蛋白抗原区段丰富且亲水性氨基酸数目明显高于疏水性氨基酸,有利于后续抗体的制备.制备的多克隆抗体效价较高,为1:2048000.Western blotting检测发现,香蕉果实贮藏过程中MaNPC1蛋白表达水平呈上升—下降—上升的变化趋势;炭疽病侵染组MaNPC1蛋白除贮藏15 d时的表达水平比对照组低外,其他贮藏时间均略高于对照组.实时荧光定量PCR检测结果表明,MaN-PC1基因相对表达量在香蕉果实贮藏过程中呈逐渐上升趋势;贮藏3～15 d,炭疽病侵染组MaNPC1基因相对表达量均显著高于对照组(P<0.05).[结论]炭疽病侵染能提高MaNPC1蛋白表达水平,故推测MaNPC1蛋白参与香蕉果实抵抗炭疽病侵染.