Details

Autor(en) / Beteiligte

• Ghibaudo, Giovanni
• Santospirito, Davide
• Sala, Andrea
• Flisi, Sara
• Taddei, Simone
• Cavirani, Sandro
• Cabassi, Clotilde Silvia

Titel

In vitro antimicrobial activity of a gel containing antimicrobial peptide AMP2041, chlorhexidine digluconate and Tris-EDTA on clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa from canine otitis

Ist Teil von

• Veterinary dermatology, 2016-10, Vol.27 (5), p.391-e98

Ort / Verlag

England: Blackwell Publishing Ltd

Erscheinungsjahr

2016

Quelle

MEDLINE

Beschreibungen/Notizen

• Background Pseudomonas aeruginosa (PA) may cause suppurative otitis externa with severe inflammation and ulceration in dogs. Multidrug resistance is commonly reported for this organism, creating a difficult therapeutic challenge. Objective The aim of this study was to evaluate the in vitro antimicrobial activity of a gel containing 0.5 μg/mL of antimicrobial peptide AMP2041, 0.07% chlorhexidine digluconate (CLX), 0.4% Tris and 0.1% EDTA on 30 clinical isolates of PA from canine otitis externa. Materials and Methods Antimicrobial activity was evaluated through minimal bactericidal concentration (MBC). Standardized bacterial suspensions were incubated with different concentrations of the gel at 37°C for 30 min and plated for colony forming unit (CFU) counts. Time‐to‐kill kinetics were evaluated with the undiluted product and at MBC for each PA strain at 30 s, 1, 5, 10, 15, 30 min, 24 and 48 h. Results The MBC was 1:64 for two of 30 strains, 1:128 for 15 of 30 strains and 1:256 for 13 of 30 strains. The geometric mean was 1:165, equivalent to a concentration of 0.003 μg/mL AMP2041 + 0.0004% CLX + 0.0024%Tris + 0.0006% EDTA. Time‐to‐kill assays with the undiluted product showed complete bactericidal effect within 30 s for all isolates, whereas at the MBC this effect was reached within 5 min for 20 of 30 isolates and within 30 min for all isolates. Bactericidal activity was maintained after 48 h for all isolates. Conclusion This gel has shown rapid, complete and long‐lasting activity against a panel of 30 PA isolates from cases of canine otitis externa. Résumé Contexte Pseudomonas aeruginosa (PA) peut entrainer une otite externe suppurée avec une sévère inflammation et des ulcérations chez le chien. Une multi‐résistance est fréquemment rapportée pour cet organisme, créant un difficile défi thérapeutique. Objectifs Le but de cette étude était d’évaluer l'activité antimicrobienne in vitro d'un gel contenant 0,5 μg/mL du peptide antimicrobien AMP2041, 0.07%, de digluconate de chlorhexidine (CLX), 0.4% de Tris et 0.1% d’EDTA sur 30 souches issues d'otites canines externes. Matériel et méthodes L'activité antimicrobienne a été évaluée par MBC (concentration bactéricide minimale). Les suspensions bactériennes standardisées ont été incubées avec différentes concentrations du gel à 37°C pendant 30 min et mis en culture pour dénombrement des CFU (colony forming unit). Les cinétiques de temps pour tuer ont été évaluées avec le produit non dilué à MBC pour chaque souche de PA à 30s, 1, 5, 10, 15, 30 mon, 24 et 48h. Résultats La MBC était de 1 :64 pour deux des 30 souches, 1 :128 pour 15 des 30 souches et 1 :256 pour 13 des 30 souches. La moyenne géométrique était 1 :165, équivalente à la concentration de 0.003 μg/mL AMP2041 + 0.0004% CLX + 0.0024% Tris + 0.0006% EDTA. Les essais de temps de tuer avec le produit non‐dilué ont montré un effet bactéricide complet dans les 30 s pour toutes les souches, tandis qu'au MBC cet effet était atteint en 5 min pour 20 des 30 souches et dans les 30 min pour toutes les souches. L'activité bactéricide était maintenue après 48h pour toutes les souches. Conclusion Ce gel a montré une activité rapide, complète et de longue action contre un panel de 30 souches de PA issues d'otites externes canines. Resumen Introducción Pseudomonas aeruginosa (PA) puede causar otitis externa supurativa con inflamación y ulceración en perros. La resistencia a múltiples fármacos se ha diseminado para este organismo, creando un desafío terapéutico de difícil solución Objetivo El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad antimicrobiana in vitro de un gel que contiene 0,5 mg / ml de péptido antimicrobiano AMP2041, 0,07% de digluconato de clorhexidina (CLX), 0.4% Tris y 0,1% de EDTA en 30 aislados clínicos de PA de otitis externa canina. Materiales y Métodos La actividad antimicrobiana se evaluó mediante la concentración bactericida mínima (MBC). Suspensiones bacterianas estandarizadas se incubaron con diferentes concentraciones de gel a 37 ° C durante 30 min y se sembraron para evaluar la formación de unidades formadoras de colonia (CFU). La cinética del tiempo para destruir los organismos fue evaluada con el producto sin diluir y a la MBC para cada cepa de PA a los 30 s, 1, 5, 10, 15, 30 min, 24 y 48 h. Resultados La MBC fue 1:64 para dos cepas de 30 cepas, 1: 128 en 15 de 30 cepas y 1: 256 en 13 de 30 cepas. La media geométrica fue de 1: 165, equivalente a una concentración de 0,003 mg / ml AMP2041 + 0,0004% CLX + 0,0024% Tris + 0,0006% EDTA. Los ensayos del tiempo transcurrido hasta destruir los organismos con el producto sin diluir mostraron un efecto bactericida completo dentro de los 30 primeros segundos para todos los aislados, mientras que a la MBC se produjo este efecto dentro de 5 minutos para 20 de los 30 aislados y dentro de 30 minutos para todos los aislados. La actividad bactericida se mantuvo después de 48 h para todos los aislados. Conclusión Este gel ha mostrado una actividad rápida, completa y duradera frente a un panel de 30 aislados de PA de casos de otitis externa canina. Zusammenfassung Hintergrund Pseudomonas aeruginosa (PA) kann eine suppurative Otitis externa mit starker Entzündung und Ulzerierung bei Hunden verursachen. Für diesen Organismus wird häufig eine Multi‐Resistenz beschrieben, die eine therapeutische Herausforderung darstellt. Ziel Das Ziel dieser Studie war eine Evaluierung der in vitro antimikrobiellen Aktivität eines kommerziellen otologischen Gels, welches 0,5µg/mL eines antimikrobiellen Peptids AMP2041, 0,07% Chlorhexidin Digluconat (CLX), 0,4% Tris und 0,1% EDTA bei 30 klinischen Isolaten von PA von Otitis externa von Hunden. Material und Methode Die antimikrobielle Wirkung wurde anhand der minimalen bakteriziden Konzentration (MBC) evaluiert. Standardisierte Bakteriensuspensionen wurden mit verschiedenen Konzentrationen des Gels bei 37°C für 30 Minuten inkubiert und für Kolonie‐bildende Einheiten (CFU) auf Platten ausgestrichen. Die „Time‐to‐Kill“ Kinetik wurde mit dem unverdünnten Produkt evaluiert und mittels MBC für jeden PA Stamm bei 30s, 1, 5, 10, 15, 30 Minuten, sowie nach 24 und 48h. Ergebnisse Die MBC betrug 1:64 bei zwei der 30 Stämme, 1:128 bei 1 der 30 Stämme und 1:256 bei 13 der 30 Stämme. Der geometrische Durchschnitt lag bei 1:165, was einem Equivalent der Konzentration bei 0,003 µg/mL AMP2041 + 0,0004% CLX + 0,0024% Tris + 0,0006% EDTA entsprach. Die „Time‐to‐Kill“ Assays mit dem unverdünnten Produkt zeigten innerhalb von 30 s für alle Isolate eine vollständige bakterizide Wirkung, während bei der MBC diese Wirkung erst nach 5 Minuten für 20 der 30 Isolate und innerhalb von 30 min für alle Isolate eintrat. Die bakterizide Wirkung konnte 48 h lang für alle Isolate aufrechterhalten werden. Schlussfolgerung Dieses Produkt zeigte eine rasche, gänzliche und langwirksame Aktivität gegenüber einer Auswahl von 30 PA Isolaten von Fällen mit caniner Otitis externa. 摘要 背景 铜绿假单胞菌(PA)可能导致犬化脓性外耳炎,耳道伴有严重炎症和溃疡。这种微生物常见多重耐药,给治疗带来了巨大挑战。 目的 本次研究目的为评估一款商品化耳部药膏,针对外耳炎分离出的30株临床菌株,其体外抗微生物活性,耳药含有0.5 µg/mL的抗微生物肽AMP20410、0.07%葡萄糖酸氯已定、0.4% Tris、0.1% EDTA。 材料与方法 通过最小抑菌浓度(MBC)评估抗微生物活性。不同浓度的标准细菌悬浮液在37°C下孵化30分钟,并用集落形成单位(CFU)计数。每个PA菌株在30秒、1、5、10、15、30分钟、24和48小时,评估未稀释产品的杀伤时间动力学和MBC。 结果 30株菌株中有两株MBC为1:64,十五株为1:128,十三株为1:256。几何学平均值为1:165,等价浓度为0.003 µg/mL AMP2041 + 0.0004% CLX + 0.0024%Tris+ 0.0006% EDTA。评估未稀释产品杀伤时间,所有菌株30秒内有完全杀菌效果。所有菌株杀菌活性可维持到48h以后。 总结与临床意义 对犬外耳炎病例的30株PA,该产品显示出快速、完全、长时间的杀菌活性。 要約 背景 Pseudomonas aeruginosa(PA)は、犬に重度の炎症と潰瘍を伴う化膿性外耳炎を引き起こす。本病原体の多剤耐性が一般的に報告されており、治療を困難にさせている。 目的 本研究の目的は、犬外耳炎患者より分離した30株のPAを用いて、市販の耳用ゲル(0.5 μg/mLの抗菌ペプチドAMP2041、0.05%クロルヘキシジングルコネート(CLX)、0.4%Tris、0.1%EDTAを含む)のvitroにおける抗菌効果を評価すること。 方法 抗菌効果は最小殺菌濃度(MBC)によって評価した。標準細菌浮遊液をそれぞれ異なる濃度のゲルとともに、37°Cで30分間培養し、コロニー形成単位(CFU)測定のために培地に塗布した。原液商品および各PA株のMBCを用いて、30 秒、1分、5分、10分、15分、30分、24時間、48時間培養し、殺菌時間動態(time‐to‐kill kinetics)を評価した。 結果 MBCは30株中、2株において1:64、15株において1:128、13株において1:256であった。幾何平均は1:165で、これは0.003 μg/mlのAMP2041 + 0.0004% CLX + 0.0024% Tris + 0.0006% EDTAと等しい。原液商品を用いた殺菌時間動態では、すべての分離株において30分以内に完全な殺菌効果を示した。一方で、MBCを用いた場合、この効果は30株中20株で5分以内に発揮され、すべての分離株において30分以内に発揮された。すべての分離株において、殺菌効果は48時間持続した。 結論 本商品は犬の外耳炎症例から分離した30株のPAに対して、迅速で完全かつ長時間持続性の効果を示す。 Resumo Contexto Pseudomonas aeruginosa (PA) pode causar otite externa supurativa com inflamação severa e ulceração em cães. Multirresistência é comumente relatada neste microrganismo, criando um difícil desafio terapêutico. Objetivo O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro de um gel contendo 0,5 µg/mL do peptídeo antimicrobiano AMP2041, digluconato de clorexidine (CLX) 0,07%, Tris 0,4% e EDTA 0,1% em 30 isolados clínicos de PA de otite externa de canina. Materiais e métodos Atividade antimicrobiana foi avaliada por concentração antimicrobiana mínima (CAM). Suspensões bacterianas padronizadas foram incubadas com concentrações diferentes do gel a 37oC por 30 minutos e plaqueado para contagem de unidades formadoras de colônia (UFC). A cinética de tempo de eliminação foram avaliadas com o produto não diluído e em CAM para cada cepa de PA em 30 s, 1, 5, 10, 15, 30 min, 24 e 48 horas, Resultados O CAM foi 1:64 para duas das 30 cepas, 1:128 para 15 de 30 cepas e 1:256 para 13 das 30 cepas. A média geométrica foi 1:165, equivalente à concentração de 0,003 µg/mL AMP2041 + CLX 0,0004% + Tris 0,0024% + EDTA 0,0006%. Ensaios de tempo de eliminação com o produto não diluído demonstrou efeito bactericida completo em 30 segundos para todos os isolados, enquanto no CAM, este efeito foi alcançado em cinco minutos para 20 dos 30 islados e em 30 minutos para todos os isolados. Atividade bactericida foi mantida após 48 horas para todos os isolados. Conclusões Este gel demonstrou atividade rápida, completa e duradoura contra um painel de 30 isolados de PA de casos de otite externa canina. Background– Pseudomonas aeruginosa (PA) may cause suppurative otitis externa with severe inflammation and ulceration in dogs. Multidrug resistance is commonly reported for this organ