Details

Autor(en) / Beteiligte

• Boisvert, Marie-Pierre

Titel

Identification et caractérisation de protéines pneumococciques capables de protéger contre l'infection expérimentale

Ort / Verlag

ProQuest Dissertations & Theses

Erscheinungsjahr

2001

Quelle

ProQuest Dissertations & Theses A&I

Beschreibungen/Notizen

• Streptococcus pneumoniae est un pathogène important. Il est d'ailleurs l'agent bactérien le plus fréquemment impliqué dans le développement d'otites, de pneumonies, de méningites et de bactérémies. Pendant longtemps, les polysaccharides capsulaires ont retenu tout l'intérêt, ainsi les protéines pneumococciques sont encore peu connues. En ce qui concerne celles qui le sont, aucune ne possède toutes les propriétés idéales requises pour la composition d'un vaccin, soit la protection complète, l'accessibilité à la surface et la conservation antigénique. L'objectif de notre recherche était l'identification de protéines de surface pouvant composer un vaccin. Une librairie génomique construite à partir de l'ADN obtenu de la souche de S. pneumoniae SP64 et du vecteur phagique 1 Zap Express a été criblée à l'aide de sérums de souris immunisées avec des préparations protéiques protectrices. Soixante-quatre clones recombinants immunoréactifs ont ainsi été détectés. Suite à des étapes de purification et d'excision des phagemides recombinants, des épreuves d'immunobuvardage et d'hybridation à l'aide de sondes spécifiques à la pyruvate oxydase et à la protéine A de surface du pneumocoque (PspA) ont permis l'identification de clones correspondant à ces protéines. L'immunisation passive de souris avec des sérums de lapins exempts des anticorps reconnaissant ces deux protéines a démontré que la capacité de ces sérums à protéger contre l'infection expérimentale n'est pas seulement due à la PspA. Le séquençage des inserts des clones recombinants sélectionnés a permis l'identification de gènes codant pour des protéines connues ainsi que des gènes codant pour des protéines nouvelles, notamment le gène du clone 70. Ce gène a été cloné dans un vecteur d'expression plasmidique afin d'exprimer la protéine recombinante MPB70. Malheureusement, la vaccination à l'aide de cette protéine recombinante n'a pas conféré une immunité protectrice contre la bactérémie et la pneumonie expérimentale.