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The ability to overexpress 6-phosphofructo-2-kinase/fructose 2,6-bisphosphatase (PFK-2)(FB-Pase-2) or a truncated form of the enzyme with only the bisphosphatase domain allowed us to analyze the relative role of the kinase and the bisphosphatase activities in regulating fructose 2,6-bisphosphate (Fru-2,6-P2) concentration and to elucidate their differential metabolic impact in epithelial Mv1Lu cells.