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Autor(en) / Beteiligte

• 田新瑞 田新利 王慧芳 常琴 霍如婕 殷得莉 郑国平

Titel

β－连环素通路对转化生长因子β1致肺纤维化的调控作

Ist Teil von

• 中华医学杂志, 2016, Vol.96 (24), p.1929-1933

Erscheinungsjahr

2016

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Quelle

Free E-Journal (出版社公開部分のみ）

Beschreibungen/Notizen

• 目的探讨β－连环素通路对转化生长因子β1（TGF－β1）致肺纤维化的调控作用。方法体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE－6TN细胞）分为四组：A1.对照组；B1.加5 μg/L TGF－β1的TGF－β1组；C1.转染真核表达载体pcDNA3.0（pcDNA）后加5 μg/L TGF－β1的pcDNA＋TGF－β1组；D1.转染β－连环素敲除载体[F－（β－TrCP）－Ecad]后加5 μg/L TGF－β1的F－（β－TrCP）－Ecad＋TGF－β1组。24 h后，显微镜下观察各组细胞形态，Western印迹法检测各组细胞上皮钙黏素、α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）和纤维连接蛋白（Fn）表达；实时荧光定量－聚合酶链反应（RT－PCR）检测各组细胞培养上清液中促纤维化转录产物Snail mRNA的表达。体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（CRL－2192细胞）分为五组：A2.对照组；B2.加20 μg/L干扰素γ的干扰素γ组；C2.加10 μg/L TGF－β1和20 μg/L干扰素γ的TGF－β1＋干扰素γ组；D2.转染F－（β－TrCP）－Ecad后加入C2组相同试剂的F－（β－TrCP）－Ecad＋TGF－β1＋干扰素γ组；E2.转染野生型β－连环素表达载体（WTβ－连环素）后加入C2组相同试剂的WTβ－连环素＋TGF－β1＋干扰素γ组。24 h后，Western印迹法检测A2、B2、C2组中β－连环素蛋白的表达；RT－PCR检测各组细胞培养上清液诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达。结果B1、C1组RLE－6TN细胞形态变为梭形，D1组细胞形态基本呈铺路石样；B1、C1组RLE－6TN细胞纤维细胞特征蛋白α－SMA、Fn蛋白及下游促纤维化转录产物Snail mRNA表达均显著高于A1组，而上皮细胞特征蛋白上皮钙黏素蛋白表达显著低于A1组；D1组细胞α－SMA、Fn蛋白、Snail mRNA表达均显著低于C1组（0.352±0.076比0.937±0.303、0.319±0.072比0.903±0.211、3.675±0.642比9.708±2.031），而上皮钙黏素蛋白表达显著高于C1组（1.482±0.227比0.604±0.121）（均P〈0.05）。CRL－2192细胞中，β－连环素蛋白表达水平低且A2、B2、C2组β－连环素蛋白表达差异无统计学意义；B2组iNOS mRNA表达显著高于A2、C