Details

Autor(en) / Beteiligte

• 侯伟 沃健儿 刘克洲 李敏伟

Titel

10-23DNA enzyme对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的切割活性

Ist Teil von

• Zhejiang da xue xue bao. Journal of Zhejiang University. Medical sciences. Yi xue ban, 2006, Vol.35 (5), p.507-511

Erscheinungsjahr

2006

Quelle

EZB Electronic Journals Library

Beschreibungen/Notizen

• 目的：探讨10—23DNA enzyme对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性。方法：设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A^1816UG的特异性脱氧核酶，分别命名为DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9。应用体外转录的方法获得相应的底物RNA，观察DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9对其的体外切割效应。以DrzBC-9为例，观察不同浓度的MgCl2对体外切割效率的影响，根据Lineweaver Burk作图法，计算相关的酶动力学参数Km、Kcat和Kcat／Km。结果：通过体外转录获得用于切割反应的底物RNA，其大小为300nt。在特定的切割条件下，DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9均能对相应的底物RNA进行有效的切割，切割产物分别为109nt和191nt。以DrzBC-9为例，在切割反应体系中缺乏MgCl2时，未见有切割反应。MgCl2浓度在150mmol．L^-1时达到最高切割效率，再提高MgCl2的浓度，切割效率未见明显增大。酶动力学参数Km、Kcat和Kcat／Km分别为1．4×10^-9mol．L^-1．6min^-1和1．1×10^9mol．L^-1·min^-1。结论：针对乙型肝炎病毒C基因的10—23DNA enzyme在体外对相应的转录产物有特异切割作用。